細(xì)胞膜熒光探針是一種親脂性的熒光染料，可以用來染細(xì)胞膜和其它脂溶性生物結(jié)構(gòu)進(jìn)入細(xì)胞膜后，本產(chǎn)品在整個(gè)細(xì)胞膜上擴(kuò)散，最佳濃度時(shí)可以使整個(gè)細(xì)胞膜染色。在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，當(dāng)與細(xì)胞膜結(jié)合后其熒光強(qiáng)度大大增強(qiáng)，細(xì)胞膜熒光探針被激發(fā)后可以發(fā)出綠色的熒光，具有很高的淬滅常數(shù)和激發(fā)態(tài)壽命。可以用標(biāo)準(zhǔn)的 FITC濾光片檢測。
細(xì)胞膜熒光探針通常不會明顯影響細(xì)胞的生存力，因此被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑。除了簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP(Fluorescence Recovery After Photobleaching)檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。
細(xì)胞膜熒光探針的使用方法：
1、染色液制備：
a、配置DMSO或EtOH 儲存液：儲存液用 DMSO或EtOH配置濃度1～5 mM。
b、工作液制備：用合適的緩沖液（如：無血清培養(yǎng)基，HBSS或PBS）稀釋儲存液，配制濃度為1～5 μM的工作液。
2、懸浮細(xì)胞染色：
a、懸浮細(xì)胞密度為1×106/mL加入到工作液中。
b、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
c、染色細(xì)胞試管在1000～1500轉(zhuǎn)離心5分鐘。
d、傾倒上清液，再次緩慢加入預(yù)溫37℃的培養(yǎng)液。
e、重復(fù)c、d步驟兩次以上。
3、粘壁細(xì)胞的染色：
a、使粘壁的細(xì)胞在無菌實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)。
b、從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。
c、在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。
d、在37 ℃培養(yǎng)細(xì)胞 2～20分鐘，不同的細(xì)胞最佳培養(yǎng)時(shí)間不同。
e、吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。
4、流式細(xì)胞儀檢測：
染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。
